Experiencia Metodológica
Manejo de técnicas para purificación de DNA, RNA y plásmido. Electroforesis de DNA y proteínas. Digestión de nucleótidos con enzimas de restricción. Clonación de genes. Amplificación de genes por PCR. Formación de cDNA por RT-PCR. Hibridación proteína-anticuerpo (Westernblot). Hibridación de ácidos nucléicos (Northern y Southernblot). Secuenciación de genes. Cuantificación de concentración de proteínas y ácidos nucléicos. Cuantificación de azúcares reductores (DNS). Construcción de bancos de genes. Análisis de SNP’s utilizando la técnica de heteroduplex. Propagación y mantenimiento de cepas de Streptomyces y E. coli. Formación de protoplastos de Streptomyces. Preparación de células competentes de E. coli. Transformación de Streptomyces y E. coli. Expresión heteróloga de genes en cepas de E. coli. Análisis de contenido genético por lisis de colonias en gel. Producción de proteínas recombinantes a nivel piloto en reactor de 2L. Purificación de proteínas recombinantes por cromatografía de afinidad. Medición de actividad de GTPasas y ATPasas a través de análisis por TLC. Medición de actividad enzimática por espectroscopía. Medición de actividad enzimática por HPLC. Interacción de proteínas mediante sistemas de doble híbrido en levadura. Análisis de proteínas por espectrometría UV-Vis. Co-Inmunoprecipitación. qPCR. Co-localización de proteínas en fibroblastos humanos. Manejo de bases de datos para análisis bioinformáticos como EMBL, GeneBank, Swiss-Prot, PDB, SCOP, CATH y KEGG, comparación de secuencias de nucleótidos o proteínas por BLAST, alineamientos múltiples usando herramientas como T-coffe y ClustalW, elaboración de fenogramas y filogenias moleculares (generación de matrices de distancia por dna/prot dist ó con dna/prot pars para la construcción de filogenias/fenogramas con UPGMA y Neighbor-Joining).
